Là một vật liệu phụ trợ trong các thí nghiệm phát hiện ELISA, một Enzyme đĩa đóng vai trò quyết định và ảnh hưởng trực tiếp đến kết quả thí nghiệm cuối cùng. chất lượng của đĩa enzym chủ yếu phụ thuộc vào độ nhạy của nó đối với sự hấp phụ protein, sự khác biệt về khả năng hấp thụ protein giữa các tấm và lỗ và sự khác biệt giữa các lô sản phẩm đã mua đĩa enzym . Do đó, việc lựa chọn một đĩa enzym sản phẩm có độ nhạy hấp phụ protein cao, sự khác biệt nhỏ giữa các lỗ về khả năng hấp phụ protein và sự khác biệt nhỏ giữa các lô là sự đảm bảo cho người thí nghiệm thu được kết quả thí nghiệm ổn định và đáng tin cậy.
đĩa enzym phân loại: theo các tiêu chuẩn phân loại khác nhau, cái đĩa có phân loại khác nhau.
1: theo số lượng lỗ, nó có thể được chia thành 96 lỗ, 48 lỗ, v.v. đĩa enzym chủ yếu được sử dụng với đầu đọc vi bản, đĩa mét trên thị trường nhiều nhất là 96 lỗ, vì vậy tấm vi mạch là 96 lỗ.
2: Theo các đáy khác nhau, nó được chia thành đáy phẳng, đáy chữ U, đáy V, v.v.
Chỉ số khúc xạ của đế phẳng thấp, phù hợp để phát hiện trong tấm vi mạch;
T chỉ số khúc xạ của vi bản U cao, thuận tiện cho việc lấy mẫu, lấy mẫu và trộn, đồng thời có thể quan sát trực tiếp sự thay đổi màu sắc mà không cần đặt lên vi bản, để xác định xem có phản ứng miễn dịch tương ứng hay không.
Tấm vi mạch của đế V có thể hấp thụ chính xác mẫu.
3: Theo khả năng liên kết khác nhau của vi bản và protein và các phân tử khác, nó được chia thành lực liên kết cao, lực liên kết trung bình và quá trình amin hóa.
(1) Lực liên kết cao
Sau bề mặt của tấm vi mạch này, khả năng liên kết protein của nó được tăng cường đáng kể, lên tới 300 ~ 400ng IgG / cm2 và trọng lượng phân tử của protein liên kết chính là> 10 kD. Việc sử dụng loại tấm vi mạch này có thể cải thiện độ nhạy, đồng thời có thể làm giảm tương đối nồng độ và lượng protein được phủ, dễ tạo ra các phản ứng không đặc hiệu hơn. Sau khi phủ kháng nguyên hoặc kháng thể, chất tẩy rửa không ion không thể bịt kín vị trí của protein không liên kết một cách hiệu quả và protein nên được sử dụng làm chất bịt kín.
(2) Lực liên kết trung bình
Các tấm microplate này liên kết thụ động với protein thông qua các liên kết kỵ nước trên bề mặt và thích hợp làm chất mang pha rắn cho các protein đại phân tử có trọng lượng phân tử > 20 kD, với khả năng liên kết protein từ 200 đến 300 ng IgG/cm2. Do đặc điểm chỉ liên kết với các đại phân tử, nó phù hợp với chất mang pha rắn là kháng thể hoặc kháng nguyên chưa được tinh chế để giảm khả năng phản ứng chéo không đặc hiệu. Tấm có thể là protein trơ hoặc chất tẩy rửa không ion làm dung dịch bịt kín.
(3) Amin hóa
Tấm vi bản này sau khi biến đổi bề mặt có một nhóm amino tích điện dương, liên kết kỵ nước của nhóm này được thay thế bằng liên kết ưa nước. Loại vi bản này thích hợp làm chất mang pha rắn cho các protein phân tử nhỏ. Sử dụng dung dịch đệm và độ pH phù hợp, bề mặt sẽ liên kết với các phân tử nhỏ tích điện âm thông qua liên kết ion. Do đặc tính ưa nước của bề mặt và khả năng liên kết cộng hóa trị với các liên kết chéo khác, nó có thể được sử dụng để cố định các phân tử protein hòa tan trong các chất khử nhiễm như Triton-100, Tween 20, v.v. Khuyết điểm của tấm này là vì tính kỵ nước giảm; hơn nữa, bề mặt cần phải được đóng lại một cách hiệu quả. Do đặc tính bề mặt ưa nước và cộng hóa trị, dung dịch bịt kín được sử dụng phải có khả năng tương tác với bất kỳ nhóm chức năng nào trong nhóm amin không phản ứng và chất liên kết ngang đã chọn.
4. Theo màu sắc có thể được chia thành trong suốt, đen và trắng.
Trong suốt được sử dụng phổ biến nhất cho hầu hết các thí nghiệm tiêm chủng liên kết với enzyme. Tương phản với tấm vi bản trong suốt, cũng có các tấm vi bản mờ đục để phát hiện dạ quang, thường là đen và trắng. Bản thân tấm vi mạch màu đen có khả năng hấp thụ ánh sáng nên tín hiệu của nó thấp hơn nhiều so với tấm vi mạch màu trắng, vì vậy nó thường được sử dụng để phát hiện ánh sáng mạnh, chẳng hạn như phát hiện huỳnh quang. Tấm vi mạch màu trắng được sử dụng để phát hiện ánh sáng yếu, thường được sử dụng cho phát quang hóa học nói chung. Ngoài ra, tấm vi mạch màu đen cũng có thể làm suy yếu vấn đề phản ứng không đặc hiệu. Đồng thời, điều quan trọng cần lưu ý là với tấm vi mạch thông thường không thể phát hiện phát sáng, vì ánh sáng phát ra từ phản ứng phát quang hóa học là đẳng hướng, nếu với tấm vi mạch trong suốt, ánh sáng sẽ không chỉ lan truyền từ hướng thẳng đứng, mà còn từ hướng nằm ngang, làm cho ánh sáng dễ dàng xuyên qua khe hở giữa lỗ và thành lỗ, dẫn đến giá trị hấp thụ ánh sáng của lỗ bị ảnh hưởng bởi ánh sáng phát ra từ lỗ lân cận.
Một tấm vi mạch tốt phải có hiệu suất hấp phụ tốt, giá trị trống thấp, đáy lỗ có độ trong suốt cao và hiệu suất tương tự giữa các tấm và giữa các lỗ của cùng một tấm. Do sự khác biệt về nguyên liệu thô và sự khác biệt trong quy trình sản xuất, chất lượng của các sản phẩm khác nhau rất khác nhau, do đó, phải kiểm tra trước hiệu suất của từng lô vi bản trước khi sử dụng. Các phương pháp kiểm tra thường được sử dụng là một nồng độ nhất định của IgG người (thường là 10 ng / ml) được phủ các giếng tấm ELISA, sau khi rửa, thêm một lượng kháng thể IgG chống người có nhãn enzyme thích hợp vào từng giếng, rửa sau khi bảo quản nhiệt, thêm màu cơ chất, dừng phản ứng enzyme và đo độ hấp thụ của dung dịch trong từng giếng tương ứng. Các điều kiện phản ứng được kiểm soát sao cho số đọc của từng giếng được giữ ở độ hấp thụ khoảng 0,8. Trung bình của tổng số bài đọc đã được tính toán. Sự khác biệt giữa giá trị trung bình của tất cả các lần đọc riêng lẻ và tất cả các lần đọc phải nhỏ hơn 10%. Ba tấm vi mạch sau đây là A, B và C là một ví dụ.
Phương pháp trực tiếp: để phát hiện sự hấp phụ của Human IgG trên bề mặt của tấm vi mạch
Phương pháp bánh sandwich kháng thể kép: kháng nguyên trong huyết thanh dương tính với kháng thể kháng người
Như có thể thấy từ hình trên, trong ba loại tấm enzyme sinh học này, tấm vi mô loại A có tác dụng hấp phụ protein tốt hơn, nhưng cũng cải thiện độ nhạy của sự hấp phụ protein, có thể cung cấp dữ liệu thực nghiệm đáng tin cậy hơn. Ngoài ra, bạn có thể hỏi về sự khác biệt của tấm đĩa. Sau đây là sự khác biệt hàng loạt của một tấm nhất định. Như có thể thấy từ biểu đồ dữ liệu chênh lệch trong lô, tấm vi mạch có độ ổn định giữa các lô tốt và chênh lệch hệ số biến thiên (CV) trong lô là khoảng 5,0%, thấp hơn đáng kể so với hệ số biến thiên trong lô dưới 10,0% trong tiêu chuẩn kiểm tra chất lượng phản ứng miễn dịch lâm sàng. Do đó, nó cũng thích hợp cho các thí nghiệm ELISA.